值得信赖的反转录试剂—Thermo Scientific RevertAid/Maxima反转录

反转录（逆转录）定义：反转录（逆转录）是以RNA为模板，通过反转录酶，合成DNA的过程。是DNA生物合成的一种特殊方式。反转录是进行基因工程过程中，以RNA为模板提取出DNA遗传信息的过程。

Thermo Fisher Scientific从常规分析到前沿领域,赛默飞创新技术帮助科学家应对复杂分析挑战,更好地开展所需工作，Thermo Scientific分子生物学针对不同客户的需求，提供以下两种系列的反转录试剂：

一.RevertAid反转录试剂——高效合成第一链cDNA

二.Maxima反转录试剂——高效、稳定扩增更多全长cDNA

一.RevertAid反转录试剂

1.反转录试剂——RevertAid反转录试剂盒

特点：

• 可以高效合成长达13 kb的全长第一链cDNA

• 最佳活性温度为42℃

• 提供RT反应所需的所有组分【酶、缓冲液、dNTP、Oligo(dT)18引物、随机六聚体引物、对照、RNA酶抑制剂等】

产品组成：

RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit 包含RevertAid Reverse Transcriptases、RiboLock RNase Inhibitors、5xReaction Buffer、dNTPMix、Oligo(dT)18引物、随机六聚体引物、对照GAPDH RNA、10 uM正向GAPDH弓|物、10)jM反向GAPDH引 物以及不含核酸酶的水。

RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit

1ug小鼠心脏总RNA作为模板，用Oligo(dT)18引物进行逆转录反应。由此合成的cDNA，再作为Taq DNA Polymerase后续PCR扩增的模板。末端2024 bp片段的成功扩增，表明长度为13.8 kb的全长RNA片段得到成功的逆转录。

2.反转录试剂——RevertAid反转录预混液（新品上市！）

Thermo Scientific RevertAid反转录预混液为RevertAid系列反转录试剂的升级产品。

特点：

• 方便——双管预混液形式，包含cDNA合成反应所需的所有组分，更方便配制对照反应

• 快速——30-60 min

• 可靠——可用于高丰度和低丰度RNA的反转录（1 pg – 2 µg），适合下游qPCR检测基因表达

3.RevertAid H Minus第一链cDNA合成试剂盒

Thermo Scientific Maxima H Minus 第一链 cDNA 合成试剂盒是高效合成第一链 cDNA 的完整系统。该试剂盒采用 Maxima H Minus 逆转录酶 (RT)，这是 M-MuLV RT 经体外进化而得到的一种高级酶。该酶在 M-MuLV RT 衍生物中具有最高热稳定性，且缺乏 RNase H 活性。Maxima H Minus 第一链 cDNA 合成试剂盒可在高温下合成高达 20 kb 的长链 cDNA（最高 65°C），可替代其他系统生产全长 cDNA。由于合成效率高，反应可在30分钟内完成。

优势：

•   增加反应温度— 第一链 cDNA 可以在42至65°C的温度范围内合成

• 高产出全长第一链 cDNA—使用长度高达 20 kb 的 RNA 模板

•   灵活引物引发—oligo(dT)18、随机六聚体、或基因特异性引物

4.RevertAid H Minus第一链cDNA合成试剂盒（含DNase I）

Thermo Scientif™ RevertAid™ H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit (with DNase I) 是以RNA为模板高效合成第一链cDNA的完整系统。试剂盒内包含DNase I，可去除RNA模板中污染的基因组DNA。该试剂盒中所使用的RevertAid H Minus Reverse Transcriptase含有点突变，完全去除了RNase H 酶活性，在cDNA合成过程中不会降解RNA-DNA复合体中的RNA。

• 整合基因组DNA去除步骤

• 可高产量合成长达13 kb的全长第一链cDNA

• 与RevertAid第一链cDNA合成试剂盒相比，产量更高，灵敏度更佳

二.Maxima反转录试剂

1. Maxima反转录酶

通过分子改造，最大限度提高cDNA合成效率

使用Thermo Scientific™独有的体外蛋白改造技术，我们对常规的M-MuLV反转录酶进行多种突变并筛选有利的突变体。该技术显著提高了酶的热稳定性、合成能力和合成速度。与野生型反转录酶相比，Maxima反转录酶和Maxima H Minus反转录酶的持续合成能力提高了50倍，并且对胍和甲酰胺等反应抑制剂的耐受性也较野生型的酶有了显著的提高。

（1）Maxima H minus反转录酶 —高效、稳定的获得更高全长cDNA产量

高热稳定性适用于高GC含量模板的反转录，整个反应过程保持高活性

Thermo Scientific™ Maxima™ H Minus反转录酶在较宽的温度范围内（42-65℃）保持高活性，可替代绝大部分的MMuLV RT衍生酶（图2）。其高热稳定性具有以下优势:

• 可有效转录具有复杂二级结构的RNA模板

• 增强基因特异性引物的特异性，使酶的性能增强

• 整个RT反应中持续的活性带来了更高的cDNA产量

                                                                                                          在一个很宽的温度范围内合成高产量的cDNA。使用1µg Invitrogen™

                                                                                                           Millennium™ RNA Markers（带polyA尾) 和oligo(dT)18引物在不同

                                                                                                              温度下合成放射性标记的cDNA，反应产物在碱性琼脂糖凝胶中分析。

在长片段RT-PCR方面的出色性能

因拥有独特突变，性能得到增强，Maxima H Minus反转录酶可以对非常长的RNA模板进行全长cDNA合成（图3）。

• 可合成20 kb cDNA，经测试的其它反转录酶则难以完成

• 特别适用于长片段RT-PCR和全长cDNA克隆

在两步法RT-PCR中扩增长达20 kb的目的片段。 以来自人类（1和 2泳道）和小鼠（3和4泳道）细胞的1 μg总RNA为模板在最佳反应条件下使用Maxima H Minus反转录酶和其它供应商的RT酶进行反转录反应。合成的cDNA用作PCR反应的模板。M: Thermo Scientific™ GeneRuler™ 1 kb Plus DNA分子量标准。

（2）Maxima 逆转录酶

Thermo Scientific Maxima 逆转录酶 (RT) 通过 M-MuLV RT 体外进化制成。该酶不仅具有 RNA 依赖性和 DNA 依赖性的聚合酶活性，还具有 RNase H 活性。与野生型 M-MuLV RT 相比，该工程化酶具有显著改善的热稳定性和稳健性，并提高了合成速率。

Maxima 逆转录酶能够在较高的温度（50 至 65°C）下从较宽范围的总 RNA 量（1 pg 至 5 µg）进行可重现的 cDNA 合成，这使得该酶成为两步法 RT-qPCR 的理想工具（参见支持性数据）。

由于具有极高的热稳定性，Maxima 酶在整个逆转录反应过程中保持完整活性，产生较高产量的 cDNA，甚至能够合成长达 20 kb 的 RNA 转录本。反应温度可提升至 65°C，以高效转录具有复杂二级结构的 RNA ，或利用基因特异性的引物提高特异性。由于其合成率的增加，逆转录酶反应可以在 15 至 30 分钟的时间内完成。

产品优势

• 较高产量的全长 cDNA 可达20 kb

•最高活性温度65° C

•热稳定性—在50°C 下孵育 60 分钟后具有90%活性

•高灵敏度—可在较宽范围总 RNA 量（1 pg 至 5 µg）中进行可重现的 cDNA 合成

•高效— 15至30分钟内完成 cDNA 合成

•整合修饰的核苷酸

2.Maxima反转录试剂盒

（1）Maxima H minus 第一链 cDNA 合成试剂盒和Maxima H minus cDNA 合成预混液(K1681,M1682)都含有双链特异性 DNase（dsDNase），其可快速高效地去除基因组DNA（图7）。获得的RNA样本不含基因组DNA，可直接用于cDNA合成反应，因此简化了实验流程（图8）。

• 实验流程中无需样品纯化中间步骤

• 改造的dsDNase可在2分钟内高效去除污染gDNA

• gDNA去除过程不会影响RNA的质和量

• 通过温和热处理（55℃）即可将dsDNase完成失活

（2）Maxima H Minus 双链 cDNA 合成试剂盒

Thermo Scientific Maxima H Minus 双链 cDNA 合成试剂盒是一套可从总 RNA 或 mRNA中高效合成双链 cDNA 的完整系统。第一链和第二链 cDNA 合成反应在同一管内进行，无需中间有机萃取或乙醇沉淀步骤。这种便利的单管形式可加速合成程序并较大限度提高 cDNA 回收率。该试剂盒包含预混组分，减少了完成该程序所需的移液步骤。

特点：

•高效合成全长双链 cDNA

•快速—在不到两小时内完成程序

•便利—预混合组分

•完整性—包括所有引物、对照品和残留 RNA 去除试剂

3. Maxima cDNA合成试剂盒

（1）RT-qPCR用 Maxima第一链cDNA合成试剂盒

Thermo Scientific Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR 是经优化用于 2-步法定量 RT-PCR (RT-qPCR) 中 cDNA 合成的方便系统。该试剂盒使用 Maxima 反转录酶 (RT)，其为 M-MuLV RT 经体外改造而得到的一种高性能酶。相比野生型 M-MuLV 反转录酶，该酶的热稳定性和合成能力上显著增强，cDNA 合成速率也得到提高。

The Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR 能够对宽范围的总 RNA 起始量（1 pg 至 5 µg）在较高温度下（42至65°C）进行可重复的 cDNA 合成。合成反应可在15至30分钟内完成。Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR 的组分已进行预混，以节省时间并减少可能出现的移液误差。

特点：

• 高产量，可合成长达 20 kb 的全长 cDNA

• 在42°C至65°C的宽温度范围内实现高效的 cDNA 合成

•增强的合成速率—在15-30分钟内完成 cDNA 合成

•高灵敏度和高特异性

（2）RT-qPCR用 Maxima第一链cDNA合成试剂盒附dsDNase

Thermo Scientific RT-qPCR用 Maxima 第一链 cDNA 合成试剂盒(含 dsDNase )，是一种针对2-步法定量 RT-PCR (RT-qPCR) 应用中的 cDNA 合成进行优化的便捷系统。其提供了一套显著简化的工作流程，将基因组 DNA 消除和 cDNA 合成结合到一管式程序中。该试剂盒包含一种新型双链特异性 DNase (dsDNase)，可在2分钟内从 RNA 制备中去除污染的基因组 DNA，而不会对 RNA 质量或数量造成损坏。针对双链 DNA 的高度特异性活性确保单链 DNA（如 cDNA 和引物）不会被切割，而 dsDNase 处理的 RNA 可直接添加至逆转录中。

对于第一链 cDNA 合成，该试剂盒采用 Maxima 逆转录酶 (RT)，这是 M-MuLV RT 经体外进化而得到的一种高级酶。该酶的热稳定性和耐受性均高于野生型 M-MuLV RT，cDNA 合成效率也有所增高。RT-qPCR用 Maxima 第一链 cDNA 合成试剂盒能够从各种来源 RNA 总量（1 pg至5 µg）进 cDNA 合成，有效工作温度高（42至65°C），重现性好。合成反应可在15至30分钟内完成。RT-qPCR用 Maxima 第一链 cDNA 合成试剂盒组分已预混合，以节省时间并减少可能出现的移液错误。

特点：

• 集成 gDNA 去除步骤

•高产出长达20 kb的全长 cDNA。

•在42°C至65°C的宽温度范围内实现高效的 cDNA 合成。

•提高合成效率—在15-30分钟内完成 cDNA 合成。

•高灵敏度和特异性

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