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MiRNA纯化与检测产品专题 二维码
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发表时间:2016-10-11 20:06作者:诺扬生物 ▶背景介绍 microRNA(miRNA)是一种机体内源性表达的单链小分子RNA,位于基因组非编码区,本身不具有开放阅读框(open reading frame,ORF),具有高度保守性,时序性和组织特异性。miRNA广泛存在于各种真核细胞中,不编码任何蛋白质,长度仅为20~24nt。成熟的miRNA 5′端有一个磷酸基团,3′端为羟基,由具有发夹状结构的约70~90nt的单链RNA前体经过Dicer酶加工后形成。成熟的miRNA形成RNA诱导的基因沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)作用于靶点mRNA,通过对mRNA剪切或抑制其翻译过程而调控基因的表达。目前人们还不明确miRNA及其靶mRNA之间的作用机制。 检测miRNA目前常用荧光定量方法检测,根据反转录的不同分为加A法和颈环法。 ▶实验流程 RNA提取(MiRNA提取)---反转录----定量PCR ▶专题列表
Ⅰ. 加A法 MiRNA纯化与检测产品专题
MIRNA提取 miRNA提取试剂盒 miRNA Purification Kit miRNA提取试剂盒专用于从各种动物组织、 植物组织、 细胞、 血清、 血浆等样本中分离纯化miRNA, 还可以提取siRNA,snRNA等其他小于200nt的小分子RNA,同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合,独特的裂解液在有效抑制RNases的同时,可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中,如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广,制备的RNA纯度高,可直接用于敏感的下游应用,如Northern Blot分析,Real-Time PCR,Microarray Analysis等。 反转录 miRNA cDNA第一链合成试剂盒 miRNA cDNA Synthesis Kit 本试剂盒采用在miRNA 3’末端加多聚A尾的方法来使miRNA具有Poly(A)尾,之后再使用Oligo(dT)-Universal tag通用逆转录引物进行逆转录反应,最终合成miRNA对应的第一链cDNA。
备注:本试剂盒须与miRNA荧光定量检测试剂盒(CW2142)配套使用。 自备实验材料:1 ng-2 μg的总 RNA,或0.1 ng-1 μg的小分子RNA。 PCR检测 miRNA荧光定量PCR检测试剂盒 miRNA qPCR Assay Kit 本试剂盒包括检测所需的2×miRNA qPCR mix 和Reverse primer. Ⅱ. 颈环法 MIRNA纯化与检测产品专题 基于SYBR Green的real-time PCR检测系统,可以从一个反应合成的cDNA中检测多至50种miRNA分子,减少了误差,节约样品。同时结合我们公司开发的一步法PCR检测试剂,可以将反转录和PCR同时进行,实验更为简单,结果更为稳定。
RISOTM RNA Isolation Reagent 产品简介 RISO是一种快捷方便的RNA提取试剂,可从细胞、组织等材料中提取RNA。在样品处理过程中,RISO可完全充分裂解样品,同时保持RNA的完整性。加入氯仿离心后,溶液形成上清层水相、中间层和下层有机相。取上清层,籍异丙醇沉淀回收RNA;中间层用乙醇沉淀可同时回收DNA;有机相可用异丙醇沉淀回收蛋白。 RISO试剂可用于少量样品 (如活检标本) RNA提取,也可用于大量样品 (如大组织器官) RNA提取。提取RNA整个过程方便快速,可在一个小时内完成,提取的RNA无蛋白和DNA的污染,纯度髙,可直接用于Northern Blotting (RNA印迹分析)、斑点杂交、进一步Poly(A)+ (mRNA) 纯化、体外翻译、RNase保护分析、RT-PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。 主要特点 1. 抗降解能力强:RNA酶 (RNase) 在RISO中快速失活,确保RNA抽提高质、高量,重复性好。 2. 细胞、组织均适用:适用于各种细胞和标本,对少量组织标本 (如活检标本) 尤其适用。 3. 操作简捷、省时,即使对初次操作者亦适用。 miRNA Q-PCR引物试剂盒 miRNA常规的检测方法主要有Microarray、Northern Blot、In SituHybridization等基于分子杂交的方法,这些方法敏感度低、耗时长、RNA的用量较大。Biomics开发出基于SYBR Green法的miRNA检测引物,配合反转录试剂和PCR试剂,即可完成对miRNA的精确定量,具有快速、特异性强、灵敏度高等优点。 此试剂盒包含了miRNA特异的逆转录引物,以及qPCR正、反向引物套装。其中茎凸环结构状的miRNA特异逆转录引物可特异性的转录成熟的miRNA。再利用高度特异的正反向引物,使miRNA定量即灵敏又高度特异。试剂盒提供了一种最低能检测到5个拷贝目标miRNA的高灵敏度的检测方法,并且具有一个7 个数量级的动态变化范围,反应的模板可以是总RNA或者已纯化的小RNA等。 Reference •Ke Xu, Xin Liang, Daling Cui et al, miR-1915 Inhibits Bcl-2 to Modulate Multidrug Resistance by Increasing Drug-Sensitivity in Human Colorectal Carcinoma Cells,Molecular Carcinogensis. Article first published online : 28 Nov 2011. |