品牌介绍

       MBL,成立于1969年，是日本第一家抗体生产商。

       公司早期致力于研究生产血浆蛋白质抗体,是抗体研究、发展和生产的先锋者。现在，公司提供3000多种细胞骨架、致癌基因产品和信号转导蛋白质抗体,标签纯化试剂盒。

       1975年，MBL成为日本首家血浆蛋白质的诊断剂的生产商，之后，公司就致力于开发、生产免疫诊断试剂，特别是自身免疫性疾病方面的诊断试剂。公司的研发能力在该领域中得到了极高的评价。MBL的自身免疫性疾病的诊断剂对医药界贡献非常大，该公司产品在自身免疫性疾病方面占据了日本国内市场80％的份额，在海外市场也同样受到欢迎。

MBL（纯化试剂盒）常见问题：

1、无法回收目标标签融合蛋白。

→ 尽管通过蛋白质印迹（Western Blotting）在纯化前的样品中检测到了标签融合蛋白的存在，但无法使用本试剂盒纯化目标标签融合蛋白时，可以直接向实验中使用的凝胶或磁珠中加入SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸 5 分钟后，通过 SDS-PAGE 或 WB 进行分析。结果中没有检测到与目的蛋白大小一致的条带时，请参照 2；可以检测到与目的蛋白大小一致的条带时请参照 3。

2、目标标签融合蛋白无法吸附于填料上。

→ 可能存在以下原因导致目标标签融合蛋白无法吸附于填料上。例如，本试剂盒使用的凝胶或磁珠与抗标签抗体结合，因此不溶性的标签融合蛋白、聚集的标签融合蛋白可能不会与抗标签凝胶或磁珠结合。另外，本试剂盒无法使用含有胍以及高浓度尿素的缓冲液。在 Data Sheet 产品实验方法的最后一页，附有细胞裂解液成分表，敬请参考。由于标签与蛋白质的相容性，可能会使标签融合蛋白的可溶性发生变化，因此，请考虑标签位置与标签的种类。

3、虽然抗标签磁珠与标签融合蛋白结合，但加入多肽洗脱缓冲液，没能洗脱出标签融合蛋白。

→ 没有洗脱标签融合蛋白时，可以尝试延长添加肽溶液后的孵育时间，或者增加肽的添加量。标签融合蛋白容易聚集时，凝胶中有时会出现目标标签融合蛋白以结合的状态聚集，从而无法洗脱。样品出现此类情况时，请更换缓冲液的组成成分，或在不会使标签融合蛋白聚集的条件下进行纯化。（例如：不使用试剂盒中的洗涤缓冲液，而使用细胞溶解缓冲液作为凝胶的洗涤缓冲液等。）更换缓冲液的组成成分时，请参考 Data Sheet 最后一页，其中记载有可使用的缓冲液成分。建议首先使用 Trial 规格的试剂盒进行尝试。

4、可以使用的细胞裂解缓冲液的种类有哪些？

→ 可以使用如 NP-40 裂解液，Tween 裂解液等包含一般表面活性剂的缓冲液，以及含有 0.1％SDS 的 RIPA 缓冲液。

5、纯化的时候标签的位置有影响吗？

→ MBL 的纯化试剂盒不受标签位置影响，可以纯化 N 端或 C 端附带标签的蛋白质。

6、进行肽洗脱时，是否可在非室温条件下，如 4℃下进行？

→ 使用 His 标签以外的标签纯化试剂盒时，在 4℃条件下可以充分洗脱。使用His 标签的纯化试剂盒，在 4℃条件下进行洗脱时，洗脱效率为室温条件下的一半以下。

（需要在 4℃条件下洗脱时，可以加入多肽洗脱液孵育过夜，然后再进行洗脱。）

7、可以从包涵体中纯化大肠菌中表达的标签融合蛋白吗？

→ 标签融合蛋白纯化试剂盒使抗标签抗体与凝胶或磁珠结合，因此无法使用含有高浓度的尿素和胍的试剂。另外，不溶性的标签融合蛋白不会与层析柱结合，因此无法使用。

8、可以使用多肽洗脱液之外的缓冲液洗脱标签融合蛋白吗？

可以用SDS-PAGE 上样缓冲液、酸性缓冲液（用0.1M glycine - HCl pH 2.3~3.0 洗脱后，使用1M TrispH8.0 进行中和）、碱性缓冲液（用0.1M NH3 pH 11.3 洗脱，使用1N acetic acid进行中和）洗脱。使用此类缓冲液洗脱时，虽然可以进行纯化，但融合蛋白可能失活。

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