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MBL-RIP/RBP相关抗体常见问题 二维码
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发表时间:2020-10-29 14:40作者:诺扬生物 ——RIP-Assay Kit/RIP-Assay Kit for microRNA • 实验中所需的细胞数为多少? →取决于细胞类型,一般1个样品准备4×10⁶~2×10⁷个细胞。建议首先使用1×10⁷个细胞进行试验。 • 可使用自制抗体进行RIP分析吗? →RNP的免疫沉淀能力根据抗体有所差异。最好使用纯化抗体,并且需要对最佳缓冲液条件进行摸索。(是否添加了high salt solution等)根据MBL迄今为止的研究发现,及时通过IP确认了RBP沉淀,也有可能出现RNA没有共同沉淀的情况。因此,建议使用生物分析仪(Bioanalyzer)和分光光度计(Nanodrop)来确认RNA是否被回收。 •可以使用Tag抗体进行RIP分析吗? →已经证实,MBL的抗Myc-tag抗体(货号M047-3,克隆:PL14)可用于RIP分析。 • 可以使用磁珠吗? →对于蛋白A和蛋白G,可以使用MBL的Protein G-Magnetic Beads(货号MJS002V2)或Dynabeads®(Thermo Fisher Scientific k.k.) • 关于RIP-Assay Kit中使用的磁珠,有何推荐和注意事项吗? →使用琼脂糖珠时,根据交联的程度(强度)可能会出现背景增高。我们建议使用Protein A(或G)Sepharose® CL-4B(GE公司)、Pierce™Protein G Plus Agarose(Thermo Fisher Scientific k.k.产品编号:22852) • 可以分离核内的RBP簇吗? →RIP-Assay Kit旨在分析“细胞质内的RNP”。RIP-Assay Kit的缓冲条件是基于细胞质/膜级分制备方法而开发的,几乎不破坏细胞核,因此基本上不可能回收核内的RNP。RIP-Assay Kit不支持诸如UV之类的交联方法。需要用户自行研究调整试验方案。 • 是否支持诸知交联(Cross-linking)之类的方法?
• 在组织样本中可以使用吗? • RIP-Assay Kit formicroRMA 和RIP-Assay Kit有什么区别?
• 请介绍最有效地获取miRNA的提取方法。 ——RiboTrap Kit • RiboTrap与EMSA(电泳迁移分析法)有什么区别? • 如何合成BrU标记RNA? • BrU标记会干扰RNA与蛋白质结合吗? • 使用RiboTrap Kit进行试验时,大约需要多少细胞呢? • 3种洗涤缓冲液有什么区别? ——BRIC Kit • 有什么方法可以检查要使用细胞的BrU标记效率? • BrU无法有效的掺入要使用的细胞。 • BRIC未能回收到BrU标记的RNA。 下一篇MBL抗修饰核酸抗体
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