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工作日8:30-17:30

雅酶蛋白定量试剂盒

 二维码 2009
发表时间:2020-06-19 11:01作者:诺扬生物

Omni-Easy™即用型 BCA 蛋白定量试剂盒
      BCA 蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研 制而成,实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链 结构能与Cu2+络合生成络合物,同时将Cu2+还原成Cu+,BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合,形成稳定的有 颜色的复合物,其在562 nm处有高的光吸收值,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可根据吸收值的大小来 测定蛋白质的含量。本试剂盒含有一系列浓度的蛋白质标准品溶液(BSA溶液),即取即用,无需稀释,方便快捷。

202006191650459065.jpg

产品列表:

产品名称

产品货号

规格

价格

Omni-Easy™即用型BCA蛋白定量试剂盒

ZJ102

500次/微孔

298

Omni-Easy™即用型BCA蛋白定量试剂盒

ZJ102L

2500次/微孔

888


产品内容:

组分

ZJ102

ZJ102L

试剂A

100mL

500mL

试剂B

3mL

15mL

即用型BSA标准品①( 0μg/mL )

1mL

5mL

即用型BSA标准品②( 125μg/mL )

1mL

5mL

即用型BSA标准品③( 250μg/mL )

1mL

5mL

即用型BSA标准品④( 500μg/mL )

1mL

5mL

即用型BSA标准品⑤( 750μg/mL )

1mL

5mL

即用型BSA标准品⑥(1000μg/mL)

1mL

5mL

即用型BSA标准品⑦(1500μg/mL)

1mL

5mL

即用型BSA标准品⑧(2000μg/mL)

1mL

5mL


产品特点

方 便 快 捷——提供即用型标准品,省去繁琐的稀释步骤;

准 确 性 高——变异系数远小于考马斯亮蓝染色法;

线性范围宽——灵敏,检测范围:20~2000μg/mL;

兼 容 性 好——与金属离子、还原剂、螯合剂及去污剂兼容性较好。


使用说明

◈以微孔酶标仪法为例:

   1. 配置显色工作液:

      a.计算显色工作液总量:

          工作液总量 =(BSA标准品样本个数+待测样本个数)×复孔数×每个样本显色工作液体积

              举例:BSA标准品样本个数为 8个,待测样本个数 3个,复孔数 3个。

                      显色工作液总量 =(8个BSA标准品样本+3个待测样本)×3个复孔×200μL(每个样本工作液体积)= 6.6mL

      b.根据计算出的显色工作液需要总量,将试剂A和试剂B按照50:1的体积比,配制显色工作液,充分 混匀。

         ★ 注意:1)由于加样可能存在误差,建议配制BCA工作液时,多配制1~2个孔。

                       2)新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24h。


    2. 定量检测

          1.分别取 即用型BSA标准品①~⑧ 各20μL加到96孔板中( BSA标准品 使用前须充分溶解摇匀);

孔号12345678
添加物标准品①标准品②标准品③标准品④标准品⑤标准品⑥标准品⑦标准品⑧
稀释液(μL2020202020202020
BSA终浓度0125250500750100015002000
(μg/mL

           2.用 1×PBS 或 0.9%生理盐水将样品适当稀释(可以多作几个梯度,如2 倍、4 倍、8 倍稀释),加
              20μL 到96 孔板的样品孔中;
           3.各孔加入200μL 显色工作液,充分混匀,盖上96 孔板盖,37℃孵育30min,冷却至室温;
            注:也可以室温放置2h,或60℃放置30min。BCA 法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长 不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果蛋白浓度较低,可在较高温度孵育,   或延长孵育时间。
           4.用酶标仪测定每个样品及BSA 标准品的A562,或540~590nm 之间的其它波长的吸光度,注意要减去空白对照( 标准品① +工作液)的吸光度;
           5.绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
           ★注意:数据处理时需要去除明显错误的值。待测样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出待测样品的浓度。


注意事项

1.本产品可以采用酶标仪(微孔检测法)或者分光光度计(试管检测法)测定蛋白浓度,如使用普通的分光光度计测定,需根据比色皿的最小检测体积,适当加大BCA 工作液的用量使不小于最小检测体积, 样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少;
2.试剂在低温条件或长期保存出现沉淀时,可搅拌或37℃温育使溶解;
3.建议每次测定蛋白样品时,都须绘制标准曲线,以获得准确数据;
4.如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表),可采用其它蛋白定量产品;
5.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
6.本产品仅限科研使用。

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Omni-Rapid™快速蛋白定量试剂盒

      Omni-Rapid™快速蛋白定量试剂盒的原理与传统BCA蛋白定量法类似,但采用了一种不同于BCA(Bicin-choninic Acid)的全新特殊的螯合剂,从而实现了对蛋白质浓度进行快速、稳定、灵敏的测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽键能与Cu2+形成络合物,将Cu2+还原成Cu+,Cu+与螯合物结合,从而发生颜色反应。本试剂盒中的螯合剂可敏感特异地与Cu+结合,只需室温孵育5 min即可形成稳定的橙黄色水溶性复合物,而传统BCA法则需在37℃下孵育30 min才可完成颜色反应。该橙黄色的复合物在480 nm处有强光吸收值,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有一系列浓度的蛋白质标准品溶液(BSA溶液),即取即用,无需稀释,方便快捷。


产品特点:

简单快速—室温5 min完成显色反应;

方便快捷—提供即用型标准品,省去繁琐的稀释步骤;

准确性高—变异系数远小于考马斯亮蓝染色法;

线性范围宽—灵敏,检测范围:20~2000 μg/mL;

兼容性好—与大多数金属离子、螯合剂及去污剂兼容性较好。


产品列表:

产品名称

产品货号

规格

价格

Omni-Rapid™快速蛋白定量试剂盒

ZJ103

500次/微孔

698



常见问题:

1、有小伙伴问,我提取细胞样本,可不可以通过细胞计数的方法代替蛋白定量?

    至少预实验的时候建议做蛋白定量。虽然蛋白定量主要目的是对样品进行均一化处理,保证上样量一致。但是另一个作用优化上样量,也十分重要。上样量太低,目标蛋白可能检测不到;上样量太高有可能导致过曝,灰度值分析误差大。有文献报道总蛋白上样量超过10ug/孔时内参蛋白不够敏感,无法检测到差异。内参蛋白理想的上样量5ug以内,目标蛋白的上样量为10-20ug。

2、定量后,内参还是不齐?

    首先,蛋白定量环节:注意样品中是否含有干扰物质,选择适合的定量方法;检测的值是否在线性范围内;做复孔,减小误差。

    其次,转膜环节:注意转膜的均一。

最后,注意内参蛋白的选择是否合适。比如GAPDH是常用的内参蛋白,但是GAPDH是糖酵解过程中的一个酶,在缺氧,糖酵解紊乱等情况会增加GAPDH在特定细胞中的表达。内参蛋白要选表达不受实验处理影响的蛋白。

    现在也有很多人用总蛋白作为内参,即通过考马斯亮蓝或者丽春红染总蛋白,伯乐推出stain-free免染胶,也可以准确反应每个泳道中的蛋白量,可以作为WB的可靠内参。

3、样品间浓度差异大,如何调节浓度?

    样品提取时,组织样品可以通过称量,细胞样品可以通过计数,等比例加入提取液。这样各组样品浓度差异就不会非常大了。



使用ZJ102/102L引用文献:

1. Cheng, B., Zhang, H., Hu, J., Peng, Y., Yang, J., Liao, X., ... & Lu, H. (2020). The immunotoxicity and neurobehavioral toxicity of zebrafish induced by famoxadone-cymoxanil. Chemosphere, 247, 125870. (IF 7.086)

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3、 XIAO, Lili, et al. Molecular Behavior of HMGB1 in the Cochlea Following Noise Exposure and in vitro. Frontiers in Cell and Developmental Biology, 2021, 9: 350.(IF 6.684)

4.WANG, Feng, et al. Accelerated Bone Regeneration by Astragaloside IV through Stimulating the Coupling of Osteogenesis and Angiogenesis. International Journal of Biological Sciences, 2021, 17.7: 1821.(IF 6.58)

5.JIANG, Qian, et al. 4-Phenylbutyric acid accelerates rehabilitation of barrier function in intestinal porcine epithelial cell (IPEC-J2) monolayer model. Animal Nutrition, 2021.(IF 6.383)

6.LIU, Chang, et al. Value of Pyruvate Carboxylase in Thyroid Fine-Needle Aspiration Wash-Out Fluid for Predicting Papillary Thyroid Cancer Lymph Node Metastasis. Frontiers in oncology, 2021, 11: 1625.(IF 6.244)

7.LIU, Heze, et al. Prenatal dexamethasone exposure induces nonalcoholic fatty liver disease in male rat offspring via the miR-122/YY1/ACE2-MAS1 pathway. Biochemical Pharmacology, 2021, 185: 114420.(IF 5.858)

8.PIAO, Jinmei, et al. Effects of real-ambient PM2. 5 exposure on lung damage modulated by Nrf2. Frontiers in pharmacology, 2021, 12: 913.(IF 5.810)

9ZHANG, Junqian, et al. Andrographolide Induces Noxa-Dependent

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12SONG, Lin; PENG, Juan; GUO, Xuejun.

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13ZHOU, Yixi, et al.

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15He, S., Chen, M., Lin, X., Lv, Z., Liang, R., & Huang, L. (2020).

Triptolide inhibits PDGF-induced proliferation of ASMCs through G0/G1 cell cycle arrest and

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17HE, Zhidong, et al. The role of MEG3 in the proliferation of palatal mesenchymal cells is related to

the TGFβ/Smad pathway in TCDD inducing cleft palate. Toxicology and Applied Pharmacology, 2021, 419: 115517.(IF 4.219)

18Su, J., Yu, B., Zhang, C., Yi, P., Li, H., Xu, C., ... & Chen, J. (2020). Long noncoding RNA

HOXC-AS3 indicates a poor prognosis and regulates tumorigenesis by binding to YBX1 in breast cancer.

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19LANG, Jiangli, et al. High glucose activates ERK1/2 to stabilize AP1 and increase MMP9 expression in diabetic foot ulcers.

Experimental Cell Research, 2021, 403.1: 112550.(IF 3.905)

20Yang, Y., Yang, X., Lin, Y., Yang, G., & Li, L. (2020). LASS2 regulates hepatocyte steatosis by interacting with NDUFS2/OXPHOS related proteins.

Biochemical and Biophysical Research Communications. (IF 3.575)


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