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雅酶蛋白定量试剂盒 二维码
2009
发表时间:2020-06-19 11:01作者:诺扬生物 Omni-Easy™即用型 BCA 蛋白定量试剂盒: BCA 蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研 制而成,实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链 结构能与Cu2+络合生成络合物,同时将Cu2+还原成Cu+,BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合,形成稳定的有 颜色的复合物,其在562 nm处有高的光吸收值,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可根据吸收值的大小来 测定蛋白质的含量。本试剂盒含有一系列浓度的蛋白质标准品溶液(BSA溶液),即取即用,无需稀释,方便快捷。产品列表:
产品内容:
产品特点 方 便 快 捷——提供即用型标准品,省去繁琐的稀释步骤; 准 确 性 高——变异系数远小于考马斯亮蓝染色法; 线性范围宽——灵敏,检测范围:20~2000μg/mL; 兼 容 性 好——与金属离子、还原剂、螯合剂及去污剂兼容性较好。 使用说明 ◈以微孔酶标仪法为例: 1. 配置显色工作液: a.计算显色工作液总量: 工作液总量 =(BSA标准品样本个数+待测样本个数)×复孔数×每个样本显色工作液体积 举例:BSA标准品样本个数为 8个,待测样本个数 3个,复孔数 3个。 显色工作液总量 =(8个BSA标准品样本+3个待测样本)×3个复孔×200μL(每个样本工作液体积)= 6.6mL b.根据计算出的显色工作液需要总量,将试剂A和试剂B按照50:1的体积比,配制显色工作液,充分 混匀。 ★ 注意:1)由于加样可能存在误差,建议配制BCA工作液时,多配制1~2个孔。 2)新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24h。 2. 定量检测 1.分别取 即用型BSA标准品①~⑧ 各20μL加到96孔板中( BSA标准品 使用前须充分溶解摇匀);
2.用 1×PBS 或 0.9%生理盐水将样品适当稀释(可以多作几个梯度,如2 倍、4 倍、8 倍稀释),加 注意事项 1.本产品可以采用酶标仪(微孔检测法)或者分光光度计(试管检测法)测定蛋白浓度,如使用普通的分光光度计测定,需根据比色皿的最小检测体积,适当加大BCA 工作液的用量使不小于最小检测体积, 样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少; Omni-Rapid™快速蛋白定量试剂盒: Omni-Rapid™快速蛋白定量试剂盒的原理与传统BCA蛋白定量法类似,但采用了一种不同于BCA(Bicin-choninic Acid)的全新特殊的螯合剂,从而实现了对蛋白质浓度进行快速、稳定、灵敏的测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽键能与Cu2+形成络合物,将Cu2+还原成Cu+,Cu+与螯合物结合,从而发生颜色反应。本试剂盒中的螯合剂可敏感特异地与Cu+结合,只需室温孵育5 min即可形成稳定的橙黄色水溶性复合物,而传统BCA法则需在37℃下孵育30 min才可完成颜色反应。该橙黄色的复合物在480 nm处有强光吸收值,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有一系列浓度的蛋白质标准品溶液(BSA溶液),即取即用,无需稀释,方便快捷。 产品特点: 简单快速—室温5 min完成显色反应; 方便快捷—提供即用型标准品,省去繁琐的稀释步骤; 准确性高—变异系数远小于考马斯亮蓝染色法; 线性范围宽—灵敏,检测范围:20~2000 μg/mL; 兼容性好—与大多数金属离子、螯合剂及去污剂兼容性较好。 产品列表:
常见问题: 1、有小伙伴问,我提取细胞样本,可不可以通过细胞计数的方法代替蛋白定量? 至少预实验的时候建议做蛋白定量。虽然蛋白定量主要目的是对样品进行均一化处理,保证上样量一致。但是另一个作用优化上样量,也十分重要。上样量太低,目标蛋白可能检测不到;上样量太高有可能导致过曝,灰度值分析误差大。有文献报道总蛋白上样量超过10ug/孔时内参蛋白不够敏感,无法检测到差异。内参蛋白理想的上样量5ug以内,目标蛋白的上样量为10-20ug。 2、定量后,内参还是不齐? 首先,蛋白定量环节:注意样品中是否含有干扰物质,选择适合的定量方法;检测的值是否在线性范围内;做复孔,减小误差。 其次,转膜环节:注意转膜的均一。 最后,注意内参蛋白的选择是否合适。比如GAPDH是常用的内参蛋白,但是GAPDH是糖酵解过程中的一个酶,在缺氧,糖酵解紊乱等情况会增加GAPDH在特定细胞中的表达。内参蛋白要选表达不受实验处理影响的蛋白。 现在也有很多人用总蛋白作为内参,即通过考马斯亮蓝或者丽春红染总蛋白,伯乐推出stain-free免染胶,也可以准确反应每个泳道中的蛋白量,可以作为WB的可靠内参。 3、样品间浓度差异大,如何调节浓度? 样品提取时,组织样品可以通过称量,细胞样品可以通过计数,等比例加入提取液。这样各组样品浓度差异就不会非常大了。 使用ZJ102/102L引用文献: 1. Cheng, B., Zhang, H., Hu, J., Peng, Y., Yang, J., Liao, X., ... & Lu, H. (2020). The immunotoxicity and neurobehavioral toxicity of zebrafish induced by famoxadone-cymoxanil. Chemosphere, 247, 125870. (IF 7.086) 2.WANG, Feng, et al. Adrenomedullin 2 improves bone regeneration in type 1 diabetic rats by restoring imbalanced macrophage polarization and impaired osteogenesis. Stem cell research & therapy, 2021, 12.1: 1-15.(IF 6.832) 3、 XIAO, Lili, et al. Molecular Behavior of HMGB1 in the Cochlea Following Noise Exposure and in vitro. Frontiers in Cell and Developmental Biology, 2021, 9: 350.(IF 6.684) 4.WANG, Feng, et al. Accelerated Bone Regeneration by Astragaloside IV through Stimulating the Coupling of Osteogenesis and Angiogenesis. International Journal of Biological Sciences, 2021, 17.7: 1821.(IF 6.58) 5.JIANG, Qian, et al. 4-Phenylbutyric acid accelerates rehabilitation of barrier function in intestinal porcine epithelial cell (IPEC-J2) monolayer model. Animal Nutrition, 2021.(IF 6.383) 6.LIU, Chang, et al. Value of Pyruvate Carboxylase in Thyroid Fine-Needle Aspiration Wash-Out Fluid for Predicting Papillary Thyroid Cancer Lymph Node Metastasis. Frontiers in oncology, 2021, 11: 1625.(IF 6.244) 7.LIU, Heze, et al. Prenatal dexamethasone exposure induces nonalcoholic fatty liver disease in male rat offspring via the miR-122/YY1/ACE2-MAS1 pathway. Biochemical Pharmacology, 2021, 185: 114420.(IF 5.858) 8.PIAO, Jinmei, et al. Effects of real-ambient PM2. 5 exposure on lung damage modulated by Nrf2. Frontiers in pharmacology, 2021, 12: 913.(IF 5.810) 9、ZHANG, Junqian, et al. Andrographolide Induces Noxa-Dependent Apoptosis by Transactivating ATF4 in Human Lung Adenocarcinoma Cells. Frontiers in pharmacology, 2021, 12: 924.(IF 5.810) 10、Feng, F., Cheng, P., Xu, S., Li, N., Wang, H., Zhang, Y., & Wang, W. (2020). Tanshinone IIA attenuates silica-induced pulmonary fibrosis via Nrf2-mediated inhibition of EMT and TGF-β1/Smad signaling. Chemico-Biological Interactions, 109024.(IF 5.192) 11、SU, Juanjuan, et al. Identification and Biochemical Characterization of a Surfactant-Tolerant Chondroitinase VhChlABC from Vibrio hyugaensis LWW-1. Marine Drugs, 2021, 19.7: 399.(IF 5.118) 12、SONG, Lin; PENG, Juan; GUO, Xuejun. Exosomal lncRNA TCONS_00064356 derived from injured alveolar epithelial type II cells affects the biological characteristics of mesenchymal stem cells. Life Sciences, 2021, 278: 119568.(IF 5.037) 13、ZHOU, Yixi, et al. Chronic exposure to environmentally realistic levels of diuron impacts the behaviour of adult marine medaka (Oryzias melastigma). Aquatic Toxicology, 2021, 105917.(IF 4.964) 14、Zhao, Y., Tao, M., Wang, R., Guo, Y., & Wang, M. (2020). Japonicone V, a sesquiterpene lactone derivative from the flowers of Inula japonica, inhibits hepatitis E virus replication by targeting virus-associated autophagy. Journal of Functional Foods, 65, 103755.(IF 4.451) 15、He, S., Chen, M., Lin, X., Lv, Z., Liang, R., & Huang, L. (2020). Triptolide inhibits PDGF-induced proliferation of ASMCs through G0/G1 cell cycle arrest and suppression of the AKT/NF-κB/cyclinD1 signaling pathway. European Journal of Pharmacology, 867, 172811.(IF 4.432) 16、Kang, L., Miao, J. X., Cao, L. H., Miao, Y. Y., Liu, H., Xiang, L., & Song, Y. G. (2020). Total glucosides of herbaceous peony (Paeonia lactiflora Pall.) flower attenuate adenine-and ethambutol-induced hyperuricaemia in rats. Journal of Ethnopharmacology, 113054.(IF 4.360) 17、HE, Zhidong, et al. The role of MEG3 in the proliferation of palatal mesenchymal cells is related to the TGFβ/Smad pathway in TCDD inducing cleft palate. Toxicology and Applied Pharmacology, 2021, 419: 115517.(IF 4.219) 18、Su, J., Yu, B., Zhang, C., Yi, P., Li, H., Xu, C., ... & Chen, J. (2020). Long noncoding RNA HOXC-AS3 indicates a poor prognosis and regulates tumorigenesis by binding to YBX1 in breast cancer. American journal of translational research, 12(10), 6335. (IF 4.060) 19、LANG, Jiangli, et al. High glucose activates ERK1/2 to stabilize AP1 and increase MMP9 expression in diabetic foot ulcers. Experimental Cell Research, 2021, 403.1: 112550.(IF 3.905) 20、Yang, Y., Yang, X., Lin, Y., Yang, G., & Li, L. (2020). LASS2 regulates hepatocyte steatosis by interacting with NDUFS2/OXPHOS related proteins. Biochemical and Biophysical Research Communications. (IF 3.575)
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