质粒提取专题（含2.5L质粒巨抽）

      质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外，质粒DNA上携带了部分的基因信息，经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。

      从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。分离质粒DNA有三个步骤：培养细菌使质粒扩增，收集和裂解细菌，分离和纯化质粒DNA。

      在质粒提取过程中，由于机械力、酸碱度、试剂等的原因，可能使质粒DNA链发生断裂。所以，多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒：共价闭合环状DNA（cccDNA）： 质粒的两条链没有断裂；超螺旋开环DNA（ocDNA）： 质粒的一条链断裂；松弛的环状分子线形DNA（lDNA）： 质粒的两条链均断裂；线性分子质粒DNA的分子构型 。

      质粒DNA琼脂塘凝胶电泳模式图可分为：松弛线性的DNA； 松弛开环的OC构型； 超螺旋的SC构型。由于琼脂糖中加有嵌入型染料溴化乙锭，因此，在紫外线照射下DNA电泳带成橘黄色。 道中的SC DNA走在最前沿，OC DNA则位于凝胶的最后边；道中的L DNA 是经核酸内切限制酶切割质粒之后产生的，它在凝胶中的位置介于OC DNA 和 SC DNA 之间。

目录分类：

产品列表：

一、康为质粒提取产品

二、ZYMO质粒提取产品

1. ZymoPURE™ 质粒DNA提取—小提、中提

产品特点:
• 操作简便，快速：抽提时间 <20min；创新 Zymo-Spin ™ Column( 硅胶膜柱 ) 设计，可通过抽真空或离心完成快速结合；
包含注射过滤器，用于快速清除菌体碎片；
• 产物质量高；ZymoPURE ™硅胶膜柱结合技术，可获得高浓度质粒 DNA，可达 3 μg/ul，适用于下游各种应用；通过一步漂洗来去除内毒素、盐类、蛋白和 RNA，获得高纯度转染级别质粒 DNA
• 所有组分具有颜色标识，过程可视；

操作流程：

实验数据：

分别用 ZymoPURE™ Maxiprep kit 和两个 Q 公司 Kit 从 150ml 过夜培养的 JM109 E. coli 中提取质粒 DNA（pGL3®），对比质粒产量、浓度。提取的质粒用 lipo2000 转染 HeLa 细胞，48 小时后通过 ONE-Glo™ Luciferase Assay System 和 Veritas™ Microplate Luminometer 检测荧光素酶表达水平（Shown are means ± SEM of 8 transfections)。