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WAKO-PolyamineRED肿瘤活细胞多胺检测

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发表时间:2023-09-21 16:54作者:诺扬生物来源:WAKO

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PolyamineRED是一种与多胺特异性反应,并向多胺添加红色荧光色素TAMRA的试剂。不与单胺或氨基酸反应。由于本产品可用于活细胞,因此能够简单地检测出细胞内多胺并进行半定量。


本产品基于国立研究开发法人 理化学研究所 开拓研究本部 田中生体机能合成化学研究室的研究成果商品化。

本产品仅供科研使用。不可应用于临床。


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PolyamineRED拥有细胞膜透过性,在细胞内与多胺发生反应并将TAMRA偶联至多胺。由于TAMRA与多胺结合后会失去膜透过性,所以可以通过清洗去除未反应的PolyamineRED,因此可选择性实现细胞内多胺的可视化。已知多胺会在癌细胞中过量产生,所以使用PolyamineRED可以检测出癌细胞中重要的多胺信号。详情请参考应用实例。


◆多胺是什么

多胺是含有两个或以上氨基的直链烷基胺的总称。已从生物体中鉴定出各种结构的多胺,主要为腐胺(putrescine),亚精胺(Spermidine)和精胺(Spermine)。以亚mM~mM的高浓度存在于哺乳动物、微生物、植物的细胞中。


据报导,它在生理pH下显示聚阳离子性,并通过与DNA / RNA和蛋白的相互作用呈现出各种生理活性。由于癌细胞中多胺合成基因ornithine decarboxylase (ODC)的过表达会引起多胺的过量产生,因此多胺有望成为癌症标记物。但是,由于多胺的结构简单因而难以分析,仅限于通过HPLC的低通量分析。


另外,分析多胺必须在细胞破裂后进行去除蛋白和其他小分子的前处理,所以可能会因前处理产生偏差。因此,无需前处理便可在活细胞内定量多胺的方法备受期待。


PolyamineRED为理化学研究所 田中主任研究员等所开发的新型多胺检测试剂,是一款特异性标记细胞内多胺的TAMRA并使其可视化的全球首创多胺检测试剂。

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多胺在生物体内合成的路径


◆特点

● PolyamineRED是一款利用甘氨酸炔丙基酯与多胺特异性且快速反应的试剂,可通过在多胺标记TAMRA使细胞内多胺可视化

● 可用罗丹明滤光片组观察(激发/发射波长:560 nm/585 nm)

● 对多胺(腐胺,亚精胺,精胺)显示高特异性,几乎不与氨基酸或单胺反应

● 拥有细胞膜透过性,可用于活细胞的多胺检测

● 可通过清洗去除未反应试剂,而多胺-TAMRA复合物因多胺的聚阳离子性保留在细胞内

● 无需前处理,仅需简单地操作即可检测细胞内多胺

● 可通过细胞内荧光强度半定量多胺总量*

● 可观察细胞内多胺的分布情况

* 由于可检测出多胺总量,所以无法定量单个多胺种类。

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◆应用

● 细胞内多胺的半定量

● 评价多胺在细胞内的分布情况


◆操作方法概要

1. 添加终浓度10~30 μM的PolyamineRED至新制备的培养基中;

2. 去除培养细胞的培养基,使用PBS清洗两遍;

3. 添加含有PolyamineRED的培养基;

4. 培养10 min以上;

5. 使用PBS清洗细胞三遍;

6. 甲醛固定后,进行任意染色并观察。

※甲醇固定可能会导致多胺成分泄漏出细胞外,因此不建议使用甲醇固定。

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◆应用实例

癌细胞与非癌细胞的多胺检测

使用30 μM的PolyamineRED处理3种癌细胞(MCF7,MDA-MB-231,SK-BR-3)与2种非癌细胞(MCF10A,淋巴球)10 min,使用PBS清洗三遍,在DAPI染色后用福尔马林固定细胞。在癌细胞中观察到了TAMRA信号。另一方面,由于非癌细胞中的多胺数量较少,因此在MCF10与淋巴球中几乎检测不出TAMRA信号。

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多胺在细胞内的分布

使用30 μM的PolyamineRED处理MDA-MB-231 10 min后进行DAPI染色并固定细胞。在MDA-MB-231中,细胞核内检测出的多胺比细胞质多。使用PolyamineRED,可以评价细胞内多胺的分布情况。

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参考:甘氨酸炔丙基酯的多胺特异性

使用HPLC追溯甘氨酸炔丙基酯的模型分子(Benzyloxycarbonyl glycine propagyl ester)与多胺(腐胺,亚精胺,精胺),氨基酸以及单胺的反应。

仅与多胺(精胺,亚精胺,腐胺)发生反应,而对单胺(肾上腺素)和氨基酸(赖氨酸)几乎不反应。由此可知,氨基数越多,对多胺的反应性越高。(引用:原著论文)

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原著论文

K. Vong, K. Tsubokura, Y. Nakao, T. Tanei, S. Noguchi, S. Kitazume, N. Taniguchi, K. Tanaka, Chem. Commun., 53, 8403~8406 (2017)."Cancer cell targeting driven by selective polyamine reactivity with glycine propargyl esters."


◆产品列表

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※ 仅供实验研究用,不可用于临床诊断。


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