CCK-8现货供应

CellCounting Kit-8 (CCK-8)细胞增殖/毒性检测试剂盒

◆产品信息：（现货供应）

◆试剂盒反应原理简介：

       Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒, NY-K08, 500T）是检测细胞增殖、细胞存活和细胞毒性的试剂盒，是一种基于水溶性四唑盐的广泛应用快速高灵敏度检测试剂盒，为MTT法的替代方法，试剂盒中采用水溶性四唑盐在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈良好线性关系。

CCK-8和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点：

★     检测灵敏度更高，更易溶解，并且更稳定；

★     一次性加入，减少操作误差，方便快捷；

★     水溶性，无需换液，尤其适合于悬浮细胞，减少离心丢失细胞的烦恼；

★     无需放射性同位素和有机溶剂，细胞毒性低；

★     酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响；

★     无需预制，即开即用；

★     特别适于高通量药物筛选。

◆试剂盒使用说明

1. 接种细胞悬液于96孔板中，100µL/孔，每孔细胞数>1000个(如采用其他24/48孔板，培养体系中的溶液量和细胞数目按照比例扩大)。将培养板在培养箱预培养(在37℃，5% CO₂的条件下过夜稳定或>5小时)。

2. 做细胞数目测定时，向每孔加入10µL CCK-8溶液（采用24/48孔板，加入CCK-8溶液的量按比例增加，如400µl细胞培养体系中加入40µL CCK-8溶液），本步注意不要生成气泡，气泡折光影响O.D值)。

3. 将培养板在二氧化碳培养箱内孵育1.0-4.0小时（可间歇在酶标仪上测定，选择最佳的时间点），大部分细胞1-2小时（37℃，5% CO₂的条件下）合适。

4. 用酶标仪测定在450-490 nm处的吸光度（OD值）以600-650nm为参考(参比波长)。

5. 如果暂不测定O.D值，打算以后测定的话，向每孔中加入1% w/v SDS溶液或0.1 M HCl溶液10µL，并避光保湿室温条件下无菌保存24-36小时内有效。

◆注意事项

★      使用96孔板检测培养时间较长需考虑蒸发的问题。由于96孔板周围一圈最容易蒸发，采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，无菌水或培养液；也可把孔板置于湿度充分的地方缓解蒸发。

★      如细胞因培养时间较长，pH发生变化而培养基的颜色变化，建议加CCK-8试剂前更换新培养基。

★      本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一抗氧化剂会干扰检测，需设法去除后测定。

★      用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

★      如要计算细胞具体数目，需做标准曲线，其方法是将密度较高(不超过10⁷/µL数量级)的细胞按比例（一般是1/2, 1/3）稀释后，一般要做6-10个细胞浓度梯度（最低的浓度细胞数目不低于每1000个，即104/ml），然后按照OD值绘制标准曲线。此法也可用来检验试剂质量：

详：将状态良好的贴壁细胞消化终止后（悬浮细胞直接用），保持浓度适中（可通过终止消化时加入完全培养基的毫升数决定），在96孔板上加入0,1, 2,4,8,16,32,64, 80, 100 ul细胞（为一组），不足100ul的孔加培养基补足到100ul（原理同蛋白定量），做三到四组减少操作误差。将培养板在培养箱内孵育1.0-4.0小时（间歇在酶标仪上测定，选择最佳时间点），大部分细胞1-2小时合适。最大的OD值在0.5-2.0之间，OD值低于0.5表明细胞数（密度）偏低，大于2.0细胞数偏高，需调整细胞浓度重新做。

★     细胞存活（Cell viability）计算方法为：Cell viability(%) =（加药处理组的OD值－空白组OD值）/(对照组OD值－空白组OD值)×100%，空白组OD值是指含有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度。

★     凋亡率的计算方法: (对照组OD值－加药处理组的OD值）/(对照组OD值－空白组OD值)×100%.

★     增殖率的计算方法: (加药处理组的OD值－对照组OD值）/(对照组OD值－空白组OD值)×100%.

★     培养基中的酚红或普通血清可以增加空白OD值但对实验不会产生影响(以上的计算扣除空白OD值)。

★     为了您的健康和安全，请穿实验服并戴一次性手套进行上述操作。

◆保存条件

4℃避光保存一年有效。-20℃下避光可以保存2年。如需要长期保存，推荐在-20℃储藏。