ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

StemSure® Serum Replacement

　　本产品是ES细胞和iPS细胞培养中使用的血清代替品。血清含有分化诱导因子，会导致干细胞分化。使用本产品代替血清，可在ES和iPS细胞培养的同时，保持他们的未分化状态，达到稳定培养。　　本产品不含剧毒物质，将其作为普通物质处理。

　　使用本产品配制培养基培养的小鼠ES细胞，可用于制备嵌合体小鼠，并确认其种系传递。

◆特点•优势

　　●　可用于嵌合体小鼠制备，并确认其种系传递。

　　●　作为血清替代品，用于小鼠ES细胞・人IPS细胞培养。

　　●　不含剧毒物质。

◆案例•应用

1、嵌合体小鼠的制备与种系传递Update！！

　　将组装HaloTag® cDNA的目标载体导入小鼠ES细胞，用含有StemSure®   Serum Replacement（SSR）的培养基培养。确认载体导入小鼠ES细胞后，将其注入至ICR小鼠的胚盘胞，并移植至ICR小鼠的子宫。得到的嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配，获得F1小鼠。

(1) 　嵌合体小鼠

　　收集嵌合体小鼠的血液，用TRITC（四甲基若丹明异硫氰酸盐）对HaloTag® 蛋白质染色。发现小鼠ES细胞源的HaloTag® 的血液被染色，可确认为嵌合化。

(2)　F1小鼠

　　F1小鼠的血液发现HaloTag® 存在，可确认用SSR培养基培养的ES细胞嵌合小鼠能够正常存活。

2、人iPS细胞201B7的培养

(1)　克隆形态与ALP染色

　　已确认可用StemSure®Serum Replacement（SSR）培养人iPS细胞201B7株。ALP染色呈阳性。

　　<培养基组成>
　　D-MEM/Ham's F-12 + 20% SSR + 2mmol/l L-Glutamine +1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 5ng/ml bFGF

(2)　未分化标记的发现

　　使用StemSure®Serum Replacement（SSR）培养的人iPS细胞201B7株，确认各种未分化标记（Sox2, Oct3/4, SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-81）呈阳性。

3、小鼠ES细胞D3的培养

(1)　细胞形态与ALP染色

　　使用StemSure®Serum Replacement（SSR）培养小鼠ES细胞D3，能观察到小鼠ES细胞群特有的光泽，ALP染色呈阳性。

(2)　细胞增殖曲线

　　用不同培养基培养小鼠ES细胞D3进行14继代培养，比较细胞增殖。

　　如下图所示StemSure® 系列与A公司有同等的性能。

　　< StemSure® 系列培养基组成>
　　StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1mmol/lStemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

　　（使用胶原包被的12孔板）

(3)　细胞群倍加数*

　　使用不同培养基对小鼠ES细胞D3进行继代培养，检查培养天数与细胞群倍加数的关系。

　　下图显示StemSure® 系列与A公司产品的细胞群倍加数相同。

　　*细胞群倍加数 cell population doubling level，缩写PDL，指从培养开始至现在细胞群的倍增次数。

　　<培养基组成>

　　StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

　　（使用胶原包被的12孔板）

(4)　未分化标记的检测

　　使用StemSure® 系列对小鼠ES细胞D3进行5代继代培养，各种未分化标记（Nanog, Oct3/4, Sox2, SSEA-1）呈阳性。

　　<培养基组成>
　　StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF

4、畸形瘤的形成

　　用StemSure® 系列对小鼠ES细胞D3进行继代培养。对免疫不全小鼠的皮下注射培养后细胞。在形成皮下畸形瘤，其内部检测出神经组织（外胚叶源）、软骨组织（中胚叶源）、管腔结构纤毛上皮（内胚叶源）。

　　<培养基組成 >
　　StemSure® D-MEM + 15% SSR + 2mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1mmol/l StemSure® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000units/ml StemSure® LIF