免疫组织化学（IHC）、免疫细胞化学（ICC）和免疫荧光（IF）是生物学研究中经常用到的三种应用，IHC的样本类型是组织，ICC的样本类型是细胞，而IF指的是在实验中使用了荧光标记。
IHC&ICC实验大致分为样品制备（固定、脱蜡）、抗原修复（表位/抗原修复/还原）、封闭、抗体检测、显色、复染、封片等7个步骤；若与IF结合，则分别被称为IHF和ICF实验，意为Immunohistofluo-rescence（免疫组织荧光）和Immunocytofluorescence（免疫细胞荧光）。
免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
IHC、ICC和IF原理很简单，即通过抗原抗体的特异性结合和特殊的标记技术，对细胞或组织内的抗原进行定位、定性和定量。但要想得到完美的IHC/ICC或IF结果，必须处理好每个步骤的细节，同时确保所用试剂的品质。
Bioss作为一家抗体及相关产品的专业生产商和供应商，共拥有一抗产品约20000+种，涉及14000+种靶标蛋白，包括标签抗体、磷酸化抗体、内参抗体、甲基化抗体、乙酰化抗体、药物与化合物抗体和植物抗体等多种类别，部分精品抗体经过严格的KO（Knock Out）验证；二抗产品约1000+种，可提供20多种靶标物种现货抗体；常用试剂约2000种，包含常见生物学实验所涉及的大部分试剂。本册为大家推荐IHC&ICC&IF实验所需的全套试剂。
IHC&ICC&IF全套试剂优势
IHC&ICC&IF实验流程及配套试剂
明星产品——IHC kit
编号 | 名称 | 规格 | 产品组成 |
IHC001 | 免疫组化试剂盒(抗免) | 60T/100T | PBS缓冲液；柠檬酸钠抗原修复液；内源性过氧化物酶阻断剂；抗体稀释液；封闭用正常山羊血清工作液；生物素标记羊抗免 IgG;辣根酶标记链酶卵白素工作液；DAB显色液；DAB稀释液；苏木素染液 |
IHC003 | 免疫组化试剂盒(抗鼠) | 60T/100T | PBS缓冲液；柠檬酸钠抗原修复液；内源性过氧化物酶阻断剂；抗体稀释液；封闭用正常山羊血清工作液；生物素标记羊抗小鼠IgG;辣根酶标记链酶卵白素工作液；DAB显色液；DAB稀释液；苏木素染液 |
特点：
囊括除待测一抗外 IHC 实验所需的大部分试剂；
即用型试剂盒，无需配制任何辅助试剂，只需简单稀释母液即可，为 IHC 实验提供了极大便利；
试剂盒内配有详细的说明书及操作指南，适合新手使用。
IHC&ICC&IF配套试剂表
分类 | 编号 | 名称 | 规格 |
IHC试剂盒 | IHC001 | 免疫组化试剂盒（抗兔） | 60T/100T |
IHC003 | 免疫组化试剂盒（抗鼠） | 60T/100T |
取材 | C2019 | 蔗糖-PBS 溶液（5%） | 500ml |
C2020 | 蔗糖-PBS 溶液（10%） | 500ml |
C2021 | 蔗糖-PBS 溶液（20%） | 500ml |
C2022 | 蔗糖-PBS 溶液（30%） | 500ml |
固定液 | C01-06001 | 1% 组织细胞固定液 | 100ml/500ml |
C01-06002 | 4% 组织细胞固定液 | 100ml/500ml |
C01-06003 | 8％组织细胞固定液 | 100ml/500ml |
C2058 | PFA- 蔗糖溶液 (5%) | 500ml |
C2059 | PFA- 蔗糖溶液 (10%) | 500ml |
C2060 | PFA- 蔗糖溶液 (20%) | 500ml |
C2061 | PFA- 蔗糖溶液 (30%) | 500ml |
C2023 | AAF 固定液 | 100ml/500ml |
C2026 | Carnoy 固定液 | 100ml/500ml |
C2027 | Carnoy 固定液Ⅱ | 100ml/500ml |
C2030 | Gendre 固定液 | 100ml/500ml |
C2035 | Orth 固定液 | 500ml |
C2040 | Regaud 固定液 | 500ml |
C2041 | Rossman 固定液 | 500ml |
C2034 | 中性组织细胞固定液(10%,NBF) | 500ml/500ml×10 |
C2055 | 组织细胞固定液(4%, RNase free) | 10ml×10/500ml |
C2056 | 组织细胞固定液(4% PFA, 电镜专用 ) | 10ml×10/ |
30ml×10 |
C2064 | 脂肪组织固定液 | 250ml/500ml |
脱钙液 | C2003 | Plank-Rychlo 脱钙液 | 500ml |
C2004 | Perenyi's 脱钙液 | 500ml |
C2005 | Von Ebener's 脱钙液 | 500ml |
C2006 | 甲酸脱钙液 | 500ml |
C2008 | 柠檬酸盐脱钙液 | 500ml |
C2010 | JYBL- Ⅱ脱钙液 | 500ml |
C2007 | AFIP 甲酸 - 柠檬酸液 | 2×500ml |
C2013 | 电解脱钙液( 甲酸法 ) | 500ml |
C2016 | 硫酸钠水溶液(5%) | 500ml |
C2017 | 脱钙终点检测试剂盒( 化学法 ) | 100T |
切片 | C2076 | OCT 冰冻切片包埋剂（原装进口） | 118ml/118mlx6/ |
118mlx12 |
C2077 | 樱花OCT 包埋剂（4583） | 118ml/ 118ml×12 |
C02-01001 | 多聚赖氨酸溶液（防脱片粘片剂） | 5ml/10ml/100ml |
染色 | C02-04002 | DAPI 染色液 | 10ml/50ml |
S0001 | DAPI 染色液（1mg/ml） | 1ml/10×1ml |
C02-04004 | 苏木素- 伊红染色试剂盒 | 10ml/10ml |
S0144 | 苏木素伊红混合染色液（一步法） | 100ml (50ml + 50ml)/ |
500ml (250ml + 250ml） |
消化液 | C2081 | 胰蛋白酶消化液（0.1% 用于抗原修复） | 10ml |
抗原修复液 | C02-02001 | 1× 柠檬酸钠抗原修复液（干粉 | 1L/1L×10 |
C02-02002 | 柠檬酸钠抗原修复液（100×） | 50ml/100m/ 500ml |
C02-02003 | 1×EDTA 抗原修复液（pH8.0） | 100ml |
C02-02004 | 50×EDTA 抗原修复液（pH8.0 | ）100ml |
C5077 | 细胞爬片抗原修复液（即用型） | 100ml/500ml |
C-0012 | 胰蛋白酶抗原修复液 | 3ml/10ml |
C2082 | 冰冻切片抗原修复液 | 100ml/500ml |
洗涤剂 | C01-01001 | 1×PBS 缓冲液 | 500ml/ 500ml×10 |
C01-01002 | 10×PBS 缓冲液（液体） | 50ml/500ml/ 500ml×10 |
C0103 | 1×PBS 缓冲液（干粉，2L） | 2L/2L×10/ |
2L×100 |
C01-01004 | 1×PBST 缓冲液 | 500ml/ 500ml×10 |
穿膜剂 | C03-02002 | 穿膜剂（储存液） | 50ml |
C03-03002 | 0.3% 细胞穿膜剂（即用型） | 100ml |
C03-03003 | 0.1% 细胞穿膜剂（即用型） | 100ml |
封闭用血清 | C-0005 | 封闭用正常山羊血清（原液） | 5ml/10ml/100ml |
C-0006 | 封闭用正常兔血清（原液） | 5ml/10ml |
C-0008 | 封闭用驴血清（原液） | 10ml/100ml |
C-0082 | 封闭用正常小鼠血清（原液） | 5ml |
C01-03001 | 10% 封闭山羊血清 | 30ml/100ml |
抗体稀释液 | C01-04001 | 抗体稀释液 | 30ml/100ml/ 500ml |
C01-04002 | HRP 标记抗体稀释液 | 30ml/60ml/ 100ml |
C01-04003 | AP 标记抗体稀释液 | 30ml/50ml/ 100ml |
C01-04004 | 荧光抗体稀释液 | 30ml/100ml |
C04-01005 | 酶标抗体稀释液 | 30ml/50ml/ 100ml |
检测试剂盒 | PV-0023 | 超敏二步法免疫组化检测试剂盒（兔） | 3ml/6ml/18ml |
PV-0024 | 超敏二步法免疫组化检测试剂盒（小鼠） | 3ml/6ml/18ml |
显色试剂盒 | S0339 | AEC 显色试剂盒 (20×) | 1ml/10ml |
C-0010 | 二氨基联苯胺/DAB 染色试剂盒（20×） | 0.5ml×2/1ml×2 |
C-0014 | BCIP/NBT 碱性磷酸酶显色试剂盒 （即用型） | 25ml/125ml |
封片剂 | C02-04003 | 免疫荧光抗淬灭封片剂 | 5ml |
C02-05001 | 中性树胶封片剂 | 10ml/100ml |
阴性对照 | bs-0294PC | 正常山羊对照IgG | 100ug/500ug |
bs-0295PC | 正常兔对照IgG | 100ug/500ug |
bs-0296PC | 正常小鼠对照IgG | 100ug/500ug |
bs-0310PC | 正常鸡对照IgG | 100ug/500ug |
bs-0326PC | 正常牛对照IgG | 100ug/500ug |
bs-0358PC | 正常豚鼠对照IgG | 100ug/500ug |
IHC免疫组化其他品牌试剂盒
品牌 | 品名 | 产品货号 | 规格 |
康为 | 兔/鼠通用型Streptavidin-HRP试剂盒（DAB） | CW2069S | 3ml（60片） |
四正柏 | Mouse IHC Kit / 免疫组化试剂盒(一抗小鼠来源) | FXP019 | 60 Slides |
四正柏 | Mouse IHC Kit / 免疫组化试剂盒(一抗小鼠来源) | FXP019 | 300 Slides |
四正柏 | Rabbit IHC Kit / 免疫组化试剂盒(一抗兔来源) | FXP020 | 60 Slides |
四正柏 | Rabbit IHC Kit / 免疫组化试剂盒(一抗兔来源) | FXP020 | 300 Slides |
产品问题
问题 | 可能原因 | 验证或解决的办法 |
无染色 | 一抗和二抗不匹配 | 使用针对一抗的二抗（如一抗来自兔，二抗为抗兔抗体） |
没有足够的一抗与目标蛋白结合 | 增加抗体浓度，延长4℃孵育时间（如过夜） |
由于不当储存、稀释或反复冻融造成一抗/ 二抗试剂盒失效 | 做阳性对照确认一抗/ 二抗试剂盒的有效性 |
脱蜡不彻底 | 延长脱蜡时间，更换二甲苯 |
固定步骤（使用福尔马林和多聚甲醛固定剂）修饰了抗体识别表位 | 抗原修复法暴露出抗原表位，缩短固定时间 |
蛋白位于细胞核内（核蛋白），抗体不能穿透核膜 | 在封闭液和抗体稀释液中加入通透剂 |
高背景 | 没有封闭非特异性结合或封闭不充分 | 延长封闭时间，并考虑改换封闭剂。建议用10% 正常血清封闭切片1 小时或 1-5% BSA 封闭培养细胞 30 分钟 |
一抗浓度过高 | 滴定法寻找到最佳抗体浓度，或在浓度较低抗体中延长孵育时间 |
孵育温度过高 | 4°C 孵育切片或细胞 |
二抗发生了非特异性结合（被损坏） | 不加一抗，做二抗对照 |
组织冲洗不彻底，有固定剂残留 | 所有步骤都要用PBS 充分洗涤 |
存在内源性过氧化物酶活性 | 用酶抑制剂如抑制碱性磷酸酶的盐酸左旋咪唑(2mM)，或抑制过氧化物酶的 H2O2(0.3% v/v) |
固定过度（固定剂用福尔马林和多聚甲醛）导致抗体识别抗原位点被修饰 | 改变抗原修复方法，缩短与抗原修复液的孵育时间 |
通透作用破坏膜并除去了膜蛋白 | 去除缓冲液中的通透剂 |
底物过量（酶检测法） | 缩短底物孵育时间 |
非特异性染色 | 一抗/ 二抗浓度过高 | 降低抗体浓度和或缩短孵育周期。对比不表达目标蛋白细胞的信号强度 |
存在内源性过氧化物酶活性 | 用酶抑制剂如抑制碱性磷酸酶的盐酸左旋咪唑(2mM)，或抑制过氧化物酶的 H2O2(0.3% v/v) |
一抗与被染组织同源( 如用鼠一抗测鼠组织 )，加二抗后，二抗会与同源的所有组织结合 | 应用与组织非同源的一抗 |
背景过高 | 一抗/ 二抗浓度太高 | 降低抗体浓度 |
封闭不完全 | 增加封闭时间 |
洗涤不充分 | 增加冲洗次数与时间 |
信号弱或无信号 | 细胞通透性差 | 增加通透剂的作用时间或浓度 |
一抗/ 二抗浓度太低 | 增加抗体浓度 |
一抗种属来源与二抗不匹配 | 建议实验前确认种属来源 |
荧光猝灭快 | 荧光素光稳定性差 | 选用光稳定性较好的荧光素二抗 |
普通封片剂封片 | 选用防荧光猝灭剂封片 |
细胞有自发荧光 | 使用了戊二醛固定 | 在固定后荧光染色前进行荧光淬灭，如使用NaBH4、甘氨酸等，染色前价差自发荧光 |
材料本身（如石蜡）有自发荧光 | 设立阴性对照，并通过降低荧光显微镜参数来消除背景染色 |
