如何获得更好的细胞培养效果 •保证良好的细胞培养环境 •选择合适的培养体系，争取配制和保存培养基 •注意传代时间，密度和解离操作 •及时冻存细胞，注意冻存和复苏操作
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良好的细胞培养环境
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无菌技术 •污染的来源 非无菌物品、培养基和试剂、带有微生物的空气颗粒、不干净的培养箱和污染的工作台面 •无菌技术 通过一套操作流程降低培养物被上述污染源污染的可能 •无菌技术组成要素 无菌工作区域 无菌操作 无菌试剂和培养基 良好的个人卫生
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无菌工作区域 
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无菌操作 •进行无菌操作时佩戴手套和口罩 •用70%乙醇擦拭双手和工作区域 •在将容器、培养瓶、培养板和培养皿放入细胞培养通风橱 之前，用70%乙醇擦拭其外部 •必须使用无菌器皿和设备 •无菌培养瓶、试剂瓶、培养皿等物品使用时方可揭开盖子，操作完成后尽快盖上盖子 |
| 合适的培养体系 |
| 如何选择基础培养基 •选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考： 首选：建立该细胞株所用的培养基 参考：文献 尝试：实验室常用的培养基 按需：根据细胞株的特点、实验的需要来选择 最客观：用多种培养基培养，根据实际效果选择，但较繁琐 |
| 同一种培养基有不同的形式，如何选择？ •葡萄糖浓度代表什么？ •培养基中的葡萄糖浓度范围从1g/L（5.5mM）到10g/L（55mM） •5.5mM的葡萄糖浓度与体内正常血糖的浓度类似 •高糖培养基可以满足肿瘤细胞等非生理状态细胞的体外培养需求 •选择高糖还是低糖培养基？ •根据不同细胞类型选择 通常原代细胞、干细胞使用低糖培养基 永生细胞系等病理状态的细胞使用高糖培养基 •丙酮酸钠作用 •葡萄糖不足时为细胞提供碳源 •直接进入三羧酸循环，可以被快速利用 •什么情况下添加丙酮酸钠？ •之前培养条件已含有丙酮酸钠 •代谢旺盛的细胞 •HEPES作用 •稳定pH值 •本身没有营养价值，会提高渗透压，并降低酚红对pH值的指示作用 •什么情况下需要加HEPES？ •培养条件pH波动剧烈 •细胞对pH敏感 •L-谷氨酰胺 如果正确使用，一般不需要补加 •4℃避光保存 •分装，不要反复预热 |
传代时间，密度和解离操作
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| 何时传代？ •细胞进入对数生长期、未达到汇合状态时即应进行传代 
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选择合适的解离试剂 •胰酶（Trypsin）：猪胰蛋白酶 •TrypLE（Trypsin-Like Enzyme） •利用微生物生产的动物胰蛋白酶替代物 •温和、方便、无动物来源成分 
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| 冻存与复苏 |
| 冻存细胞 •指导原则 •高细胞浓度和活性 •缓慢冷冻，每分钟降1℃ •轻柔操作 •冻存培养基 •含DMSO或甘油等冷冻保护剂 •完全冻存培养基 •Synth-a-Freeze |
| 复苏细胞 •指导原则 •迅速解冻 •轻柔操作 •高密度接种 |
