细胞培养知识库：细胞培养实验室2（三）

本期内容是对上一期“细胞培养知识库：细胞培养实验室（二）”的补充，对一些常用设备做了更详细的介绍。

培养箱的用途是为细胞生长提供合适的环境，以模拟细胞所来源的体内条件。培养箱应足够大，有强制空气循环，并应将温度波动控制在± 0.2°C以内。不锈钢培养箱易于清洁并耐腐蚀，尤其适合于需要潮湿空气条件进行培养的情况。纯铜培养箱的清洁简便，提供了一种易于护理的替代方案。尽管细胞培养箱的无菌性要求不像生物安全柜那么严格，但还是应该经常清洁培养箱以降低细胞培养物的污染风险。

培养箱类型培养箱有两大类，水套式和直热式CO₂培养箱。水套式培养箱属于较老的技术，但在断电情况下它最能保持箱内状态。直热式培养箱可提供自动高温灭菌选项，但必须专门证明其有效性。在任何情况下，都需要使用风扇进行主动空气循环，以确保整个环境保持一致，并在箱门打开后能够快速恢复。

细胞培养实验室应设置多个区域分别用于存放液体（例如培养基和试剂）、化学品（例如药物和抗生素）、耗材（例如一次性移液器、培养容器和手套）、玻璃器皿（ 例如培养瓶和玻璃移液管）、专业设备以及组织和细胞。

玻璃器皿、塑料和专业设备可在室温下存放在架子上和抽屉中。而所有培养基、试剂和化学品则必须按照标签上的说明进行储存。

某些培养基、试剂和化学品对光敏感。尽管它们可耐受光照条件下的正常实验使用，但不使用时应将其存放在黑暗条件下或用铝箔包裹起来。

冰箱

对于小型细胞培养实验室，家用冰箱（最好是没有自动除霜功能的冰箱）是在 2-8°C下储存试剂和培养基的经济便利之选。对于大型实验室，专供细胞培养使用的冷藏室则更为合适。冰箱或冷藏室都应定期清洁以避免污染。

冰柜

大多数细胞培养试剂可在-5°C至-20°C下储存；因此，超低温冰柜（即-80°C冰柜）可用于储存大多数试剂。家用冰柜是一种更便宜的选择。虽然大多数试剂可以耐受自动除霜（即自解冻）冰柜中的温度波动，但某些试剂（例如抗生素和酶）应储存在无自动除霜功能的冰柜。

随着传代次数的增加，连续培养的细胞系很可能会出现遗传不稳定性；因此，必须准备细胞工作贮备，并将其进行低温储存。请勿将细胞储存在-20°C或-80°C的冰柜中，因为细胞活率在此温度下会下降。

液氮储存系统目前主要有两大类：蒸汽相和液相储存系统，分别采用广口和细口储存容器。蒸汽相系统可降低冻存管将爆炸的风险，这对于储存生物危险性材料是必需的，而液相系统通常具有更长的静态维持时间，因此更经济。

窄颈容器的氮气蒸发速度较慢且更经济，但宽颈容器的操作更容易，且储存容量更大。

细胞计数器对于定量分析细胞的生长动力学至关重要，当在实验室中培养两个或 三个以上细胞系时，能提供很大的便利。

有些自动细胞计数仪是那种小巧的台式仪器，表面很好清理，可置于细胞培养通风橱中。由于采用先进的机器学习图像分析算法，具有自动光强度调节、聚焦、捕获、计数和保存功能，使用标准的台盼蓝染色摄取技术可在不到一分钟的时间内精准的测量每份样本的细胞计数和存活率（活细胞、死细胞和全部细胞），只需要插入带有细胞样品的玻片即可。一次性细胞计数板可最大程度的提供便利性，可重复使用玻片来实现可持续性并节约成本。自动细胞计数仪的上样量与常用的血球计数器血细胞计数仪的上样量相同，通常每份样本的典型细胞计数耗时不到一分钟，适用于多种真核细胞。