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ELISA技术简介

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发表时间:2020-11-06 16:27
  • 概述

    酶联免疫吸附试验是一种实验室常用的检测方法,广泛应用于测量溶液中的分析物(通常是抗体或抗原)的浓度。与其他基于抗体的检测方法不同的是,酶联免疫吸附实验(ELISA)或酶免疫测定(EIA)通过与固相支持物(通常为聚乙烯多孔板)的结合和系列洗涤步骤,实现特异性和非特异性相互作用的分离,并可通过最终有色产物的形成,定量分析原始样品中分析物体的含量。
    ELISA实验快速且简单,可迅速分析大量平行的样品,在基础研究和临床诊断实践中广泛使用。

  • 基本流程

    ELISA实验始于包被,即将抗原或抗体吸附到聚苯乙烯孔板中(吸附通常是溶液被动附着于固体表面上产生一层薄膜),包被后为封闭和检测步骤等。

    由于ELISA是通过与固相支持物的结合来实现分离分析,因此每个操作步骤间均有重复的洗板操作,以去除未结合的物质。在此过程中,最关键的就是要充分去除残余溶液,以防止稀释后续步骤加入的试剂。要获得最佳的一致性结果,可使用自动洗板机来完成洗涤步骤。

    ELISA实验虽然原理简单,但仍需谨慎认真对待。如样品中一些干扰物质的存在,孵育温度的变化等均可影响实验结果。其中最关键的步骤当属检测环节,因其涉及最终的信号放大以及结果读取。

    ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。通常可适用于测定细胞培养上清、血清、血浆以及组织裂解物样品等。在ELISA检测方法中有3种必要的试剂:

    ① 固相的抗原或抗体
    ② 酶标记的抗原或抗体
    ③ 酶作用的底物

    根据试剂的来源、样品的性质以及检测的实验条件,可设计出各种不同类型的ELISA检测方法。


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