MBL：技术丨Leinco体内功能级抗体PD-1和CTLA4对肿瘤生长的有效性评估

James P. Allison和Tasuku Honjo领导独立研究小组分别研究了细胞毒性T淋巴细胞抗原4（CTLA-4）和程序性细胞死亡蛋白1（PD-1），并获得了诺贝尔奖。他们通过研究发现了一类新抗癌药，此类药物被称为免疫检查点抑制剂（ICI）。

目前，ICI在检查点阻断免疫疗法中的应用非常普遍，用于治疗多类癌症。例如，PD-1已成为最热门的抗体靶点之一¹。PD-1靶向药物包括单克隆抗体纳武利尤单抗。此种单抗可用于治疗多种癌症，包括黑色素瘤、肺癌、结肠癌和肝癌。晚期黑色素瘤治疗药（如伊匹木单抗注）可阻断CTLA-4。这些抗体和其他治疗性抗体研究推动了研究级生物类似药抗体的开发。这些生物类似药抗体与获批生物制剂有相同的特异性且价格实惠，因此成为了极有用的研究工具。免疫肿瘤学（I-O）的药物开发管线目前包括数千种潜在疗法及其组合，其中多种疗法已进入临床试验阶段。

如果希望将I-O疗法快速成功地推向市场，需要考虑多种因素，包括从临床前评价迅速过渡到临床开发阶段²。然而，临床前生物医学研究普遍存在不可重复性，严重制约I-O的发展。例如，《自然》杂志的一项调查³’⁴揭示了研究界的“可重复性危机”：70%的受访者未能重复其他研究人员的研究成果，半数以上的受访者甚至未能重复自己的研究成果。临床前研究缺乏可重复性和再现性可能会严重阻碍救生疗法开发，且仅在美国造成的损失就高达280亿美元⁴。需要重复进行的临床前研究花费最高，提高临床前可重复性对药物发现和开发大有裨益。这些益处包括降低风险、提高成功率和全面提高药物开发过程的速度和效率。

约三分之一的临床前研究不可重复性是生物试剂和对照材料所致⁴。在I-O领域，如需成功重复进行研究，需考虑多种因素，包括获得可提供丰富信息的动物模型和高质量试剂。

我们能接触到的最好的癌症患者状况模拟模型依然是小鼠模型，已证明该模型可以有效地帮助理解免疫机制。因此，95%的临床前癌症研究均使用动物模型。同基因小鼠模型易于使用、适用于候选药物大规模筛选以及在药效学和作用机制研究方面颇有价值，因此常用于I-I研究。该模型利大于弊，弊端包括小鼠肿瘤组织类型并不总能与人类临床疾病的肿瘤组织类型相匹配，以及治疗反应可能无法准确预测临床转归⁵。

在为期数天至数周的基于同基因小鼠模型的研究中，如果需要生产可重复的数据，则需考虑高质量体内级抗体的可用性。广泛的质量控制（QC）已证明，低杂质水平可最大限度地减少不良影响，在持续时间较长的研究中，该现象更为显著。成本是另一个需要考虑的因素，因为抗体在预算中的占比高达10%，这意味着确保获得高质量经济高效的抗体可减少财务方面的压力。

以下病例研究展示了一个合同研究组织（CRO）将体内级抗体作为替代抗体开展经济高效的可重复研究的方法。

从供应商A处获得的鼠源单克隆抗体（mAb）出现批间变异，导致体内研究数据不可重复，从而制约了CRO同基因肿瘤模型平台的业务拓展。此外，在抗体和同型对照方面的支出也大幅增加。为了经济高效地生成可重复数据，CRO研究小组对Leinco Technologies（简称Leinco）进行了评估，认为Leinco的抗体质量更高，重复性更好，可成为潜在抗体替代供应商。此外，Leinco抗体的价格大约是供应商A的一半。

Leinco开发出了特有的制备工艺，可生产具有业内极高纯度标准的体内功能级抗体。在纯度、内毒素、聚集体和浸出蛋白A方面，该公司生产的体内PLATINUM™级功能抗体拥有极为严格的质控标准（表1和图1）。每种抗体都有不同的浓度和规格。同时体内PLATINUM™级抗体均不含病原体，并通过IDEXX Impact I PCR小鼠病原体谱检测。

研究人员比较了供应商A和Leinco生产的单克隆抗体克隆（抗PD-1、抗CTLA-4）和同型对照的体内有效性和耐受性。研究中使用了CT26同基因模型，这是一种来源于BALB/c小鼠的小鼠结直肠癌模型，也是最常用的小鼠实体瘤模型之一，属于高免疫原性肿瘤模型⁶。

表2.检测的抗体和同型对照

试验每组包含8只小鼠，每只腹腔内给药10mg/kg（PBS对照组为0），每周两次（BIW），持续3周。

Leinco生产的两种抗PD-1抗体克隆（RMP1-14和29F.1A12）均比供应商A的产品更有效（图2）。

抗CTLA-4抗体

Leinco的抗CTLA-4抗体9H10克隆的有效性显著高于供应商A生产的同一克隆的有效性（图4）。

该病例研究证实，在体内研究中，Leinco的抗体比供应商A的抗体更有效：

※ 抗PD-1抗体：Leinco生产的抗PD-1抗体克隆（RMP1-14和29F.1A12）比供应商A生产的产品更有效（TGI分别是同型对照的1.3倍和1.9倍）。

※ 抗CTLA-4抗体：Leinco的9H10克隆比供应商A的产品更有效（TGI是同型对照的1.2倍）。

以上结果，加上进行的广泛QC以及降低研发成本的可能性，使得研究小组更有决心更换供应商。

但是目前尚有改进的空间：临床前建模的重复性和准确性也受到用于制备抗体的动物种属的影响。研究已证明使用非小鼠（如基于大鼠的）抗体可导致临床罕见的异种抗原细胞性应答，并且也可能无法概括单一试剂检查点抑制剂的临床有效性和毒性⁶。Leinco目前正在努力解决这一问题，以便为I-O研究提供更好的体内级抗体。

① 免疫肿瘤学体内研究获得可重复数据取决于多种因素，包括高质量抗体的可用性。

② 大量QC数据支持体内应用Leinco的抗体。

③ 一项独立研究比较了不同克隆在体内对肿瘤生长的有效性和耐受性，结果显示与另一家供应商的抗体相比，Leinco的抗体的性能更优。

④ 使用Leinco的抗体可以在免疫肿瘤学研究中从动物模型中经济高效地生成可重复数据。

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