MBL-Autophagy Watch 试剂盒

Autophagy Watch 试剂盒

何为自噬通量检测（Autophagy Flux Assay） ?

虽然LC3-II局部存在于隔离膜与自噬体膜中，但单纯通过免疫印迹法中LC3-II条带信号的增强是无法确定有无自噬诱导的。 自噬诱导后，将经过溶酶体抑制剂处理的样品与未经过溶酶体抑制剂处理的样品进行比较，判断是否存在自噬诱导的方法称为自噬 通量检测。

产品简介：

Autophagy Watch是包含抗LC3抗体与自噬通路抑制剂的试 剂盒产品。通过免疫印迹法（WB）可以进行自噬通量检测，检测 有无自噬诱导。

产品特点：

直接标记HRP的WB用抗体，无需使用二抗，实验时间短，可以避免由于使用二抗引起的非特异性反应。

试剂盒中包含Chloroquine和Bafilomycin A1两种溶酶体抑制剂，用于阻断自噬通路。使用时用培养基1,000稀 释即可。

试剂盒中包含用于细胞染色的抗体，利用荧光标记的二抗进行细胞染色，可以直接观察自噬体。

使用Autophagy Watch的自噬检测示例：

          WB

经过饥饿处理，可以发现与营养状态 相比，LC3-II的表达增加（Lane 1,2）。 经过饥饿处理，在培养基中加入溶酶 体融合抑制剂 Chloroquine, Bafilomycin A1 后，LC3-II 会进一步增加（Lane 3,4）。 这表明由于抑制剂的作用，自噬体没有被分解，而是在积蓄。通过比较这些结果， 可以确认饥饿状态能够诱发自噬。

           IC

                   细胞在HBSS (Hank's Balanced Salt Solution)中培养后，可以观察到自噬体出现，添加抑制剂会使自噬体大量增加。

产品列表：

试剂盒组成：

Autophagy Watch相关问题：

Q1.应该如何进行饥饿诱导？

培养NRKffl胞时，可将培养基更换为Hank's Balanced Salt Solution (无血清)培养2~4小时，对细胞进行饥饿诱导。使用 无血清的DMEM培养基虽然也可以进行诱导，但是由于DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium)培养基中含有氨基 酸，因此诱导效果会减弱。

Q2.请介绍一下相关抑制剂。

抗疟药的代表性药物氯喳(Chloroquine),长期作为溶酶体活性的抑制剂被使用，现在作为一种抗癌药，其有效性也备 受关注。巴佛洛霉素A1 (Bafilomycin A1)作为一种特异性自噬抑制剂，被众多自噬研究者所使用。另外，本产品中 未包含的渥曼青霉素(Wortmannin),是一种可以在自噬早期阻断自噬进程的试剂，也常被用于自噬相关的研究中。

Q3.试剂盒中有两种LC3抗体，请问该如何区分使用呢?

克隆8E10的LC3抗体直接标记HRP,因此最适合用于WB。在IC与IP等其他方法建议使用克隆4E12。

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