四正柏：抗体标记试剂盒

免疫荧光标记技术（Immunofluorescence labeling technique）是免疫标记技术的一种，是指将已知的抗原或抗体分子标记上荧光素，使其与相对应的抗体或抗原发生特异性免疫反应，通过荧光显微镜或流式细胞术的方法，对待测物质进行定性或定量的分析，是生物学、医学领域广泛应用的免疫学技术。

在使用抗体进行信号检测的应用中（如WB、IHC、ICC、IF 或FACS），抗体标记有两种方法：直接标记和间接标记。

标准的WB使用间接标记，使用一抗检测目标抗原，然后再使用一个带有检测分子的二抗与一抗结合，但在某些情况下，最好跳过二抗及其相关步骤，使用荧光素标记抗体直接结合抗原，此种情况包括如下：

1. 二抗有非特异性结合；

2. 使用非标准生物的一抗，这时可能很难找到合适的二抗；

3. 使用来自同一物种的多个抗体；

4. 需要缩短实验时间。

   
   

4AF647R抗体标记试剂盒（产品编号APL008）

四正柏4AF647R抗体标记试剂盒（产品编号APL008）其组成包含快速标记抗体的全部所需组分。每个试剂盒可完成一次标记，每次可标记50-100μg抗体。

将抗体和荧光染料简单混合于试剂盒提供的反应缓冲溶液中，进行短时间的孵育（30min）。

标记结束后不需终止反应，无需进一步纯化步骤。

标记前需根据表1核对抗体与标记体系的兼容性，来选择是否先进行超滤，或直接进行抗体标记步骤。

接下来简单阐述下4AF647R 荧光抗体标记试剂盒操作步骤：

1. 准备待标记抗体，最佳浓度是0.5-1mg/ml

2. 将反应溶液和抗体以1:10比例混合，充分混匀

3. 将上述溶液混合物转移至染料瓶，涡旋，室温孵育30min

4. 用抗体储存溶液稀释孵育后的抗体，待用。标记抗体的浓度等于起始抗体标记的数量除以总体积。标记后的抗体储存于4℃，至少可稳定保存6个月

微型超滤离心管组分

·产品特点/优势

1. 一步标记法，反应结束后无需纯化，操作方便，节省时间；

2. 抗体回收率达100%，标记效果好，染色效果佳；

3. 为共价标记，在多色实验中，不会发生抗体间的染料转移现象；

4. 标记抗体检测通道匹配大多数实验室的流式细胞仪，实用性广；

5. 与相同荧光标记的同类试剂盒相比，性价比高。

·Q&A

第一次使用我们的4AF647R荧光抗体标记试剂盒，也许会遇到一些问题，我们汇总了常见问题及其解答：

1. 使用偶联试剂盒前是否需要纯化抗体？
   如果抗体能够达到试剂盒要求的纯度即不需再次纯化。

2. BSA或明胶是否影响抗体标记？

   浓度不超过0.1% 的 BSA和明胶对化学偶联的影响很小。

3. 抗体会形成高分子量聚集体吗？

   在试剂盒建议的浓度范围内不会。

4. 抗体浓度是否影响标记效率？

   试剂盒有推荐的最佳抗体浓度，您可通过浓缩或稀释使抗体达到合适的浓度范围，以便获得较好的标记效果。

5. 4AF647R可用于标记IgG以外的蛋白质吗？

   该试剂盒是针对IgG抗体标记优化设计的，不建议标记其他蛋白质。4AF647R标记条件可能导致 IgM 抗体变性。

6. 4AF647R可用于多色免疫标记吗？不同染料间是否会反生荧光染料的转移？

   可以的，此标记为共价标记，不会发生荧光染料的转移。

7. 用标记二抗的间接标记相比，直接标记抗体有哪些优势？

   直接免疫荧光染色操作简单，免去了二抗孵育和洗涤的步骤，允许来自同一物种的多个抗体同时孵育，避免了抗体的交叉反应，减少了实验的复杂性；且可以节约经费。

8. 该试剂盒可以标记天然抗血清或杂交瘤细胞株培养上清液吗？

   不可以，因为这些样本非抗体蛋白含量过高，而抗体含量低。

9. 实验结束后，有未标记上的游离荧光染料是否对后续实验有影响？
   我们的染料、缓冲液组分以及优化的实验步骤已经完美地解决了这个问题，不会导致非特异性染色，无需担心。

10. 对于小鼠来源的样本，可以用该试剂盒标记的抗体检测吗？

    本试剂盒可以标记源于不同种属的抗体，但检测的目的抗原需要针对该抗原（包括种属）的特异性抗体。如检测人样本的抗CD3抗体，用于标记的CD3抗体应该来源于小鼠或大鼠。

    
    

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