WAKO-质谱级赖氨酰肽链内切酶

质谱级赖氨酰肽链内切酶

Lysyl Endopeptidase^®

　　本产品是质谱分析前处理时常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶，该酶可以特异性切除赖氨酸基团C末端的多肽，可用于蛋白测序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶，可更好地切断赖氨酸基团的多肽，增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装，是方便使用的冷冻干燥品。20 μg/支可用于100-200个样品的凝胶内消化。

来源：细菌

外观：冻干粉（包含２ mmol/L Tris-HCl 缓冲液，pH８）

活性：0.03～0.07 AU/vial

分子量：27,000（琼脂糖过滤），30,000（SDS-PAGE）

溶解性：溶于水或缓冲液

稳定性：溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 缓冲液中，可在４℃稳定保存２年；在 pH 值 6.0-11.0、30℃时能稳定保存，但温度超过50℃时不稳定。

最适pH值：9.0~9.5

等电点：6.9~7.0

底物特异性：

可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH₂、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH₂、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA

抑制剂：DFP、PMSF、TLCK

◆特点

●   高特异性、高蛋白质消化率、适用于蛋白质谱分析

●   提高裂解效率、增加肽段数量

●   根据使用量特意制备小包装，方便使用

◆应用

　　分别采用胰蛋白酶（Tp）、赖氨酰肽链内切酶（Lys-C）和 Tp与Lys-C 联用进行胶内酶切的效果比较。

　　牛血清蛋白 BSA 的条带（100 ng）通过 SDS-PAGE 获得，然后分别用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 进行酶切，再用 MALDI-TOFMS 法进行分析。

　　这些蛋白酶的实验效果见下表。

表 1：Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的结果对照

这些结果表明 Lys-C 酶解的错误裂解率最低。Tp 酶解时加入 Lys-C 后，错误裂解率有所降低，同时，可以鉴定出更多的多肽。

胰蛋白酶（Tp）（图 ａ）和赖氨酰肽链内切酶（Lys-C）+Tp（ 图 ｂ）酶切后的质谱结果对照图。

Lys-C+Tp 酶切后，可以在 m/z=2000 时得到吸收峰，而单独的 Tp 酶切在 m/z=2000 时没有吸收峰。该结果表明 Lys-C 可以提高测序覆盖度。

( 数据由大阪医疗中心和妇婴健康研究所Ｙ. Wada 博士提供 )

赖氨酰肽链内切酶

　　赖氨酰肽链内切酶，最初由 Masaki 等人从土壤细菌中分离得到。该酶可以特异性剪切赖氨酸残基Ｃ末端和Ｓ-氨乙基半胱氨酸残基的肽键，用于蛋白测序和 Lys-X 化合物的酶催化合成。该酶稳定性高，在４Ｍ尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育６小时之后，仍然拥有完整的生物活性。