四正柏-细胞因子检测-CBA

• 概述

  CBA（cytometric Beads Array）流式液相多重蛋白定量技术，是一种基于磁珠的免疫分析方法，通过流式细胞检测系统同时定量检测多种可溶性蛋白。针对某一特定的因子，检测的微球大小一致，具有相同特定的荧光强度，同时包被着特异性的捕获抗体。当多种检测微球加入到样本中时，分别捕获相应的抗原，再加入荧光标记的抗体后，形成“三明治”夹心复合物，通过流式细胞术便可通过微球的荧光强度和标记抗体的荧光强度，对样品中的各检测因子进行定量分析。

  CBA原理：

  将特定的抗体偶联到已知体积大小和荧光强度的微球表面，制备成为待测因子的捕获微球。选定所需检测蛋白的捕获微球，将所有的微球与待测样本进行孵育，此时待测的细胞因子被特定的微球捕获。接着加入荧光标记的检测抗体，每个检测抗体与捕获微球上目标细胞因子进行结合，从而形成“微球-细胞因子-检测抗体”复合物。然后使用流式细胞仪对荧光信号进行收集。由于不同的细胞因子微球群具有不同的荧光强度，通过流式细胞仪可对其进行区分，达到同时检测多种蛋白的目的。而待测因子的浓度，则通过该因子的标准曲线来进行定量。

  

  基本操作步骤：

  1，标准品梯度稀释；不同的捕获微球进行混合；样本稀释
  2，仪器调整微球进行流式细胞仪实验条件的设置和优化
  3，标准品、样本与捕获微球共同孵育
  4，加入荧光标记的检测抗体
  5，洗涤并上机检测
  6，对应的软件进行数据分析
  

  优势：

  实现多参数检测：

  单个样本可同时检测多种指标，可节省样本

  适用范围广：

  可适用于多种溶液样本

  样本用量少：

  最低仅需15ul样本即可进行分析，对于稀有的样本，仅需少量即可检测出多种指标

  操作简易，耗时短：

  全程仅需3.5小时，操作简单

  灵敏度高，重复性好，稳定性强

  最高能检测到浓度为2.8pg/mL的样本

  背景低

  无酶-底物背景干扰

将传统的ELISA与CBA进行比较，CBA具有以下优点：

	传统ELISA	CBA
检测指标	单指标检测	多参数检测，目前市面上常见18个指标，更多的指标需要定制
检测对象	血清、血浆、尿液、胸腹水、细胞培养液上清、胞内蛋白等	血清、血浆、眼泪、房水、唾液、体腔灌洗液、细胞培养液上清、胞内蛋白等
样本用量	100~200ul	15ul或50ul
实验时间	需要抗体/抗原包被，实验时间大于24h	操作简单，全程3.5小时
目的细胞处理	需纯化目的细胞群	需纯化目的细胞群
样本分析	酶标仪测OD值，根据标准曲线计算出样本含量	流式细胞仪检测，专用软件分析
背景分析	酶-底物背景干扰	无酶-底物背景干扰
灵敏度	灵敏度较高，通常为20~100pg/ml，重复性较好	灵敏度高，通常为2~5pg/ml，宽检测范围，重复性好
结果分析	可定性也可定量	定性和相对定量

其他相关链接：

ELISA：（产品专题）四正柏ELISA试剂盒列表：http://www.ny-bio.com/nd.jsp?id=162#_jcp=4_18‍

             （产品专题）细胞因子检测：1.细胞因子概述：http://www.ny-bio.com/cn/nd.jsp?id=1024&id=1024

                                    2.细胞因子检测-CBA简介：http://www.ny-bio.com/cn/nd.jsp?id=1025&id=1025

                                    3.ELISA技术简介：http://www.ny-bio.com/cn/nd.jsp?id=1026&id=1026

                                    4.ELISA试剂盒及辅助试剂：http://www.ny-bio.com/cn/nd.jsp?id=1027&id=1027

                                    5.ELISA试剂盒定制服务：http://www.ny-bio.com/cn/nd.jsp?id=1028&id=1028